欧洲精品码一区二区三区免费看,人人澡人人透人人爽,日本japanese熟睡人妻,伊人久久大香线蕉AV影院

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 角膜上皮細胞培養(yǎng)實驗

    角膜上皮細胞培養(yǎng)實驗

    發(fā)布時間: 2022-12-07  點擊次數(shù): 1022次

    原理

    將角膜組織置于膠原蛋白上,使其附著。然后,在涂有纖連蛋白和膠原蛋白的培養(yǎng)皿擴增培養(yǎng)。

    材料與儀器

    D-PBSA 無血清角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)液 胰蛋白酶 EDTA Biocoat6孔培養(yǎng)板

    步驟

    一、材料

    滅菌

    無血清角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)液(keratinocyteserum-freemedium,KGM;Clonetics): 含有 0.15 mmol/LCa2-、0.1ng/ml 人上皮生長因子、5ug/ml 胰島素、0.5ug/ml 氫化可-的松和 30ug/ml 牛垂體提取物。

    EMEM(Eagle'sminimalessentialmedium)

    D-PBSA:不含 Ca2+和 Mg2+的 DulbeccoPBSA 液 FBS

    胰蛋白酶和 EDTA 混合液:0.05% 胰蛋白酶,0.5 mmol/L EDTA
    纖連蛋白和膠原蛋白混合液(fibronectin/collagen,F(xiàn)NC):10ug/ml 纖連蛋白、35ug/ml 膠原蛋白和 lOOug/mlBSA。BSA 作為穩(wěn)定劑

    Biocoat 6 孔培養(yǎng)板:涂有鼠尾 I 型膠原蛋白(B-D Biosciences)

    二、操作步驟 

     

    原代培養(yǎng) 


    1. 將供體角膜放于消毒過的物品上,上皮面朝上,用手術(shù)刀切成 12 個三角形組織片。應(yīng)一刀切下去,避免鋸割。如此仔細處理角膜可減少對膠原蛋白基質(zhì)的破壞和成纖維細胞的脫落。


    2. 將角膜組織片的上皮面翻向下,放入用鼠尾 I 型膠原蛋白預涂的 6 孔培養(yǎng)板,每孔放 4 個組織塊。


    3. 用鑷子輕壓組織片,以便使組織塊與培養(yǎng)皿表面充分接觸。將組織片放置 20 min,使其變干。


    4. 將一滴 KGM 輕輕滴于組織片上,在 37°C 和 5%CO2 條件下孵育過夜。盡管從眼庫得到的供體角膜是用含有抗菌素的培養(yǎng)液(McCarey-Kauffman 或 Dexsol) 保存的,但全部操作應(yīng)在無菌條件下進行。


    5. 第 2 天,在培養(yǎng)皿中加人 lml 培養(yǎng)液。在培養(yǎng)早期,可觀察到細胞僅從角膜緣處遷出,但沒有細胞從角膜中央部或鞏膜遷出。無血清培養(yǎng)液含有低濃度鈣(0.15 mmol/L),減少膠原蛋白基質(zhì)降解,故這種培養(yǎng)液可減少成纖維細胞長出。


    6 在植入角膜組織片后第 5 天,用鑷子將組織片取出,再加人 3 ml 培養(yǎng)液。取出組織片后,貼壁細胞繼續(xù)增殖。培養(yǎng)后第 2 周,細胞生長形成單層,呈現(xiàn)上皮具有的典型卵石狀排列特征。每個角膜約獲得 1X106?5X106 個上皮細胞。

     

    擴增培養(yǎng)

     

    7. 取出組織片后,每周換液 2 次。

     

    8 當細胞匯合達 70%?80% 時,用 D-PBSA 浸洗細胞。然后,在 37°C 條件下用胰蛋白酶和 EDTA 混合液處理 4 min。

     

    9. 用含有 10% FBS 的 D-PBSA 終止消化。

     

    10 將細胞離心后,用 KGM 混懸。計數(shù)細胞,以 1X104 個/cm2 密度將細胞接種于涂有 FNC 的培養(yǎng)皿。

     

    11 在 37°C、95% 空氣和 5%CO2 條件下培養(yǎng)。

     

    12. 胰蛋白酶處理和種植 1d 后換培養(yǎng)液。

    傳代后不久,上皮細胞呈長梭形,折光,遷移能力較強。傳代后第 1 周,細胞匯合達 70%?80% 時呈卵石狀排列。如果形成單層后繼續(xù)培養(yǎng),細胞能生長成散在的復層結(jié)構(gòu)。

    盡管角膜上皮細胞能傳至 5 代,約倍增 9?10 倍,但大多數(shù)細胞增殖發(fā)生在第 1?3 代。每個角膜約獲得 1X106?2X106 個上皮細胞。細胞常在第 5 代開始衰老。


    以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。


    安培生物科技有限公司介紹:

    安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)


產(chǎn)品中心 Products
西瓜在线看免费观看视频| 深田咏美av一区二区三区| 水蜜桃av无码| 色欲人妻综合aaaaaaaa网| 久久久精品一区aaa片| 成人性生交大片免费看中文| julia无码人妻中文字幕在线| 人人爽久久久噜噜噜婷婷| 亚洲 精品 综合 精品 自拍 | 最近免费观看在线中文2019| 麻豆国产精品va在线观看不卡| 熟女人妇 成熟妇女系列视频| 国内精品久久久久久99蜜桃 | 乱人伦人妻中文字幕无码| 年轻的朋友4 韩剧在线观看| 成人毛片100免费观看| 精品国产天线2019| 人妻丰满熟妇AV无码区动漫 | 无码熟妇人妻AV在线影片最多| 亚洲色偷偷综合亚洲av伊人蜜桃| 久久久久人妻精品区一三寸| 色综合久久88色综合天天| 国产69精品久久久久777| 人妻熟妇乱又伦精品视频| 少妇真人直播APP| 中文字幕人妻av一区二区| 亚洲国产精品成人久久| 亚洲av午夜国产精品无码中文字| 免费无码国产欧美久久18| yy111111少妇无码理论片| 夜夜爽一区二区三区精品| 国产成人无码精品久久二区三区| 亚洲成AV人在线观看网站| 亚洲啪av永久无码精品放毛片| 亚洲最大中文字幕无码网站| 邻居少妇张开双腿让我爽一夜| 久久综合狠狠色综合伊人| 色综合久久久无码中文字幕| 国产成人精品一区二区三区| 成人亚洲性情网站www在线观看| 亚洲av无一区二区三区久久|