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    如何提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長(zhǎng)率?

    發(fā)布時(shí)間: 2022-10-20  點(diǎn)擊次數(shù): 1194次

    原理

    根據(jù)人們的經(jīng)驗(yàn),腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng),建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。

    當(dāng)腫瘤組織或細(xì)胞初代接種培養(yǎng)后,常出現(xiàn)以下幾種情況:


    1.  *無(wú)細(xì)胞游出或移動(dòng);

    2.  有細(xì)胞移動(dòng)和游出,但無(wú)細(xì)胞增殖,細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間處于停滯狀態(tài)以致難以傳代;

    3.  有細(xì)胞增殖,傳若干代后停止生長(zhǎng)或衰退死亡;

    4.  傳數(shù)代后細(xì)胞增殖緩慢,經(jīng)過(guò)一段停滯期后,才又呈旺盛生長(zhǎng)狀態(tài),形成穩(wěn)定生長(zhǎng)的腫瘤傳代細(xì)胞系。

    以上現(xiàn)象說(shuō)明腫瘤細(xì)胞對(duì)體外生存條件有較高的要求,并需經(jīng)過(guò)對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)才能生長(zhǎng),因此欲獲得好的培養(yǎng)效果,不能局限于一般培養(yǎng)法,必須采用一些特殊的措施。


    材料與儀器

    瘤組織
    Hanks
    棉球

    步驟

    一、適宜底物


    如:把經(jīng)過(guò)純化的細(xì)胞接種在不同的底物上,如鼠尾膠原底層、飼細(xì)胞層等。

    二、生長(zhǎng)因子

    應(yīng)用促細(xì)胞生長(zhǎng)因子,向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細(xì)胞生長(zhǎng)因子。根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促生長(zhǎng)物,常用有胰島素、氫化可的松、雌激素以及其它生長(zhǎng)因子。

    三、動(dòng)物體媒介培養(yǎng)

    為提高腫瘤細(xì)胞對(duì)體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細(xì)胞(干細(xì)胞)的數(shù)量,可采用動(dòng)物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后,再?gòu)膭?dòng)物體內(nèi)取出進(jìn)行培養(yǎng),能提高體外培養(yǎng)的成功率。受體動(dòng)物以裸鼠最好。

    1.  瘤塊接種

    取新鮮瘤組織,用Hanks液洗凈血污,切成1~3 毫米小塊,用穿刺針頭吸一小瘤塊,用酒精棉球擦拭動(dòng)物腋部后,直接刺入皮下,注入瘤塊。

    2.  飼養(yǎng)觀察,待腫瘤生長(zhǎng)達(dá)較大體積后,剝?nèi)〕隽鼋M織。

    3.  進(jìn)行體外培養(yǎng)。

    4.  為防止失敗,仍取部分瘤組織繼續(xù)在裸鼠體內(nèi)傳代。通過(guò)裸鼠媒介接種,有活力的腫瘤細(xì)胞數(shù)量增多,細(xì)胞培養(yǎng)易于成功。
     
    腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法與培養(yǎng)正常細(xì)胞*相同,但成功率比正常細(xì)胞高。


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